前言

抗体-小分子药物偶联物（ADCs）是一类重要的治疗性生物制品，能够通过病理特异性抗体精确识别靶向细胞，利用内吞作用顺利进入这些细胞，然后释放出偶联的小分子药物，从而实现靶向细胞的有效杀灭，并尽量减少对正常细胞的伤害。由于ADC的设计原理，其被形象地比喻为“生物导弹”。自2000年FDA批准第一个ADC药物Mylotarg®（gemtuzumab ozogamicin）以来，到2025年6月，全球已有19个ADC获批上市。在2023年，全球ADC的销售总额首次突破100亿美元，并在2024年持续保持强劲增长，销售额再次超过100亿美元。在2024年销售额排名前十的ADC中，排名第二的是由罗氏生产的KADCYLA（恩美曲妥珠，赫赛莱）。该药物于2013年获FDA批准，用于治疗HER2阳性乳腺癌，预计2024年销售额约为23亿美元。

KADCYLA是一种靶向HER2的ADC，其由人源化抗-HER2 IgG1曲妥珠单抗与微管抑制药物DM1（美坦辛衍生物）通过稳定的硫醚连接体MCC共价结合，分子量范围在147至158kDa，其药物/单抗偶联比（DAR）分布为0至8，平均DAR约为35。正因其结构复杂，对其进行表征显得极具挑战性。在本研究中，我们利用今年在美国质谱年会（ASMS）上发布的新一代二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro Biopharma对KADCYLA进行了全面的表征，证明了这一平台在生物制药领域的卓越分析能力，尤其是在电子转移解离辅助高能碰撞碎裂（EThcD）的应用上，显著帮助我们精准识别药物偶联位点以及翻译后修饰（PTM）。

应用亮点

如前文所述，最新一代的二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro Biopharma被广泛用于KADCYLA的深入表征。此仪器的独特之处在于其质量检测范围扩展至m/z=12,000 Da（需配置BioPharma option），可在非变性条件下针对单克隆抗体的单体、二聚体、三聚体及其他大分子量蛋白复合物进行分子量测定。ETD功能的选配，使得在与高能碰撞碎裂（HCD）联合使用时，快速灵敏的ETD/EThcD碎裂可以提供全面的蛋白序列覆盖率和PTM鉴定信息。

KADCYLA在非变性条件下的完整分子量测定是生物医药产品表征中不可或缺的一部分。对于 ADC 来说，完整分子量、平均 DAR 值和药物负载分布也是药物质量的关键属性。在此次研究中，我们在非变性条件下测定了KADCYLA的完整分子量，此方法采用中性缓冲盐体系，使得蛋白分子更接近天然状态，进而降低了质量信号之间的干扰，提供了更为准确的测定结果。

基于EThcD的肽图分析是生物治疗型产品表征中的重要技术之一，能够实现序列覆盖度、定位各种化学修饰以及翻译后修饰的定量分析等。采用双酶解技术 对KADCYLA进行的分析，结果表明，使用EThcD获取的二级谱图提供了丰富的信息，可以精确定位偶联位点并进行异构化氨基酸的鉴定。

总结：本文展示了使用新一代二合一超高分辨质谱仪Excedion Pro Biopharma对KADCYLA的表征结果。在非变性条件下成功测定了药物偶联数目分布并获得了均匀的DAR值。EThcD碎裂技术使得我们能够在一个实验中精确实现100%的序列覆盖，识别常见的翻译后修饰，为生物医药复杂分子的全面表征提供了可靠支持。欲了解更多信息，请访问88858cc永利官网。